互助县001科技特派员工作站开展野骆驼粪便中乳酸菌的筛选工作

乳酸菌具备天然生物安全性、无毒副作用、无残留隐患且不诱导耐药性产生等突出优势，符合“减抗、禁抗”政策导向下的绿色养殖需求。研究表明乳酸菌在发酵过程中大量分泌乳酸、乙酸、GABA、抗氧化肽及胞外多糖等活性分子，同时这些产物还能稳定饲料中的维生素 E、多酚等易氧化成分，减少脂质过氧化，从而提高饲料品质。

研究方法

粪便的采集

从青海省格尔木市采集了野生食草动物野骆驼的新鲜粪便样本。采样前采用双筒望远镜远距离观察，待动物离场后迅速收集，确保样本来源独立，避免种群交叉影响。采样时优先选取粪便团块顶部或中心颗粒，以降低土壤污染；每份样本更换全新一次性PE手套，防止交叉污染。样本收集后立即存入含无菌30%甘油的25mL采样管中，4℃暂存以保持稳定性。所有样本均于每日上午至下午早些时段完成采集，最大限度减少高温、强风对样本质量的影响，为后续分析提供可靠基础。

粪便中乳酸菌的分离纯化与鉴定

从野骆驼粪便中取2g，加入无菌水稀释，静置后取上清液进行梯度稀释，得到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀释液。取不同梯度的稀释液100μL，在MRS固体培养基中涂布以挑选乳酸菌。在MRS固体培养基中37℃培养12h~24h后挑选具有不同形态且符合乳酸菌菌落形态的菌株，将其接种于MRS液体培养基中，摇晃混匀液体培养基，用接种环在MRS固体培养基上划线接种，重复3~5次直到培养基中菌落形态一致。将纯化后的乳酸菌培养液以1:1与30%甘油混合保存于2ml EP管，放置-80℃冰箱内进行保存。

乳酸菌的形态学鉴定、分子生物学鉴定

形态学鉴定：将分离纯化出的乳酸菌在MRS固体培养基上进行平板划线，在37℃培养箱中恒温培养24h后，观察单菌落尺寸、形状、表面特征、边缘形状、色泽、透明程度、湿润程度等，显微观察细胞形态（革兰染色、杆/球状、芽孢、运动性），初步判定菌株类别。

分子生物学鉴定：在MRS培养基中活化乳酸菌，按照乳酸菌基因组DNA的提取试剂盒说明书提取基因组DNA。以基因组DNA为模板，然后用通用16s引物PCR扩增乳酸菌的特异性DNA片段，引物序列为27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′。将PCR产物送测序公司测序，测序结果应用NCBIBlast在线比对工具对测序结果进行同源性比对，以确定菌株名称。

二、结果

经分离纯化后，共从野骆驼粪便样本中获得57株疑似乳酸菌菌株。通过系统的鉴定分析，57株菌中包含乳酸片球菌49株、黏膜乳杆菌2株和海氏肠球菌6株，证实这些从野骆驼粪便中筛选出的菌株均为乳酸菌，为后续益生功能研究提供了菌种资源。