孙万成 2024-11-06 14:25:29

    酶解pH对ADH激活率和多肽得率的影响 测定碱性蛋白酶在不同的酶解pH条件下对青稞酒糟蛋白肽得率及其ADH激活率的影响，结果如图1所示。在pH9~10时青稞酒糟蛋白肽的ADH激活率和得率随着pH的增大而升高，是由于pH值的增加，蛋白质的负电荷增加，使其发生蛋白质-水相互作用，蛋白质溶解度增加，与Berta等人的研究一致[10]。当pH为10时，表现出最大的ADH激活率（31.5%）和蛋白肽得率（30.07%），主要原因可能是pH环境影响了酶的活性和底物的构象[11]，导致青稞酒糟蛋白肽呈现不同的ADH激活率和得率。随着pH的继续增大，在强碱环境下，蛋白质发生变性，使ADH激活率和多肽得率降低。

孙万成 2024-11-06 14:25:29

    当提取温度从45℃升至65℃，青稞酒糟蛋白肽ADH激活率和得率均呈现先上升后下降的趋势。而且在温度为55℃时达到最大，分别是31.67%和28.97%。前期随着温度的升高，在一定的范围内能够加快酶解反应速度，提高底物与酶的结合概率，进而影响HBSG蛋白肽的ADH激活率和得率，而温度过高则会导致蛋白质构象发生改变[12]，使得HBSG的解酒活性下降。 随着加酶量的增大，蛋白肽ADH激活率和得率增加，结果如图3所示。当碱性蛋白酶添加量过少时，HBSG蛋白不能被彻底水解，当酶添加量从2KU/g提升至4KU/g，ADH激活率和得率分别达到最大值21.21%和25.67%，继续增加酶用量，解酒活性和得率都有下降的趋势。可能与酶浓度和底物之间的饱和度有关，随着酶添加量的增加，更多的肽段发生水解，然而更多肽键的断裂会导致蛋白质分子不稳定[13]。

孙万成 2024-11-06 14:25:29

    使用响应面分析法筛选乙醇脱氢酶激活率最高的青稞酒糟蛋白肽最佳提取工艺。响应面分析试验结果见表2，通过用Design-Expert 13.0软件进行回归拟合，求出回归方程Y=40.82-0.44A+1.25B+0.69C+0.32AB-0.81AC+0.73BC-3.39A2-4.90B2-3.14C2，由表3可知，该模型F=91.81，P<0.0001，拟合出的模型方程极显著，说明回归模型和实际数据拟合性较好。F失拟0.40，P失拟0.7659，P失拟大于0.05，失拟项不显著。模型的决定系数 R2为 0.9916，说明模型具有高的显著性，而 R2Adj=0.9808，能够解释实验98.08%的响应值变异，说明此实验模型与真实数据拟合程度良好，该回归方程可以更好的反映该响应值的变化。该模型，B（温度）和C（加酶量）有极显著影响（P<0.01）；但是A（pH）影响相对较小（P>0.05）；交互项AC（pH和加酶量）和BC（温度和加酶量）有显著影响（P<0.05），AB（pH和温度）不显著（P>0.05）；二次项A2、B2、C2对模型响应面有极显著影响（P<0.0001）；总体模型P<0.0001，说明回归模型达到了特别显著水平。结果表明，各因素水平下，对乙醇脱氢酶激活率的影响顺序依次为：B（温度）>C（加酶量）>A（pH）。

孙万成 2024-11-06 14:25:29

    各组小鼠血清AST、TG水平如图2所示，与Control组相比，模型组中的AST含量和TG含量均显著上升（P < 0.05）（图a-b）。相反，HBSG多酚和HBSG多肽处理组小鼠，AST和TG含量显著降低(P < 0.05)。其中DT组中AST、TG含量分别降低了30.83%、44.35%。DF组中AST、TG含量分别降低了29.08%、33.87% 。此外，肝脏酶含量变化如(图c-f)所示，与Control组相比，M组中SOD活力显著下降（P< 0.05），表明ALI小鼠肝脏中的氧化应激水平显著升高。相反，多肽组和多酚组中SOD活力和GSH含量显著上升，表明HBSG多肽和HBSG多酚处理都能够显著提高机体的抗氧化能力(P<0.05)。与Control组相比，M组中肝脏ALDH酶活力的显著升高(P<0.05)，可能跟酒精的摄入有关， 但是HBSG肽和HBSG多酚处理组的ALDH活性升高程度远高于模型组（P<0.01）。说明多肽和多酚处理使ALI小鼠酒精代谢能力增强，从而达到缓解肝损伤的目的，而且DT组比DF组在增加ALDH活性方面优势更加突出。与此同时，MDA含量与肝脏细胞膜的脂质过氧化程度密切相关，M组中肝脏MDA含量相比Control组显著上升，说明摄入酒精使M组的脂质过氧化程度加重 。

孙万成 2024-11-06 14:25:29

    为了研究HBSG多肽和HBSG多酚对ALI小鼠肝脏代谢产物的影响，我们使用非靶向代谢组学(LC-MS)分析小鼠肝脏的代谢产物。基于ESI+或ESI－模式下的PLS-DA评分图结果发现（图5a、5b），不同组别样本明显分离且距离较远，说明不同分组肝脏代谢存在显著差异。M组与Control组肝脏代谢物存在明显分离，表明过量饮酒明显影响肝脏代谢。而M组与DT组和DF组之间存在明显的隔离，表明DT和DF干预可以显着改变过量饮酒小鼠的肝脏代谢紊乱。 过量饮酒导致肝损伤一直是全球的热点话题，被认为是全球肝脏相关疾病死亡的主要原因。酒精代谢损伤可分为两部分，一是乙醛过量对肝细胞的毒性作用造成的直接损害，另一部分是其他外界因素造成的间接损害。酒精会直接损害肝脏，导致酒精性肝病的发展。此外，肝脏更容易受到氧化应激、ROS积累、脂质过氧化和其他外来因素的影响，这些因素会引发更复杂的病理，最终导致肝损伤。近年来，许多研究发现生物活性肽和多酚类物质对酒精肝损伤就有一定的保护作用，如玉米胚芽粉白蛋白肽、黑豆衍生肽、豆粕肽、薏苡仁蛋白水解物、槲皮素多酚、姜黄多酚、山萘酚、莲藕多酚。因此，本文旨在研究HBSG肽和HBSG多酚对酒精诱导的肝损伤的影响。