叶培麟 2024-10-14 08:58:49

    1乳酸菌复苏 从-80℃冰箱中取出保种的两株菌：乳肠球菌H49(CCTCC NO:M20232102)、乳酸片球菌HZ49(CCTCC NO:M20232103) ，室温融化后准备复苏；按1%的比例加入到10mL MRS液体培养基中，培养24h后再取其菌液加入到新的10mL MRS液体培养基中培养24h，此步骤共重复三次。接着在MRS固体培养基上进行纯化，在倒好的MRS固体培养基平板上划线培养，24h后观察菌落形态，判断有无污染；根据菌落形态挑取单菌落到10mL的MRS液体培养基中，培养24h，培养步骤同上，重复3次。以上所有步骤培养后都要观察细菌生长情况（培养基浑浊程度，平板有无菌落生长），若细菌生长状况差或未生长则重新取另一管保种的细菌进行复苏。 2涂布稀释、计数 按1%的比例将复苏好的细菌接种到400mL的MRS液体培养基中进行扩大培养，培养24h后，取少量菌液混匀，按105，106，107，108，109的倍数进行梯度稀释，于MRS固体培养基上点样进行活菌计数，点样完成后于37℃培养箱中过夜培养，培养完成后进行计数确定菌液浓度，其余菌液放入4℃冰箱中保存备用。

叶培麟 2024-10-14 08:56:52

     1. 合成3对毒力基因引物：cylA、gelE和ace，引物见表1，PCR反应体系同上，扩增产物在2%琼脂糖凝胶电泳30 min。 2. 对筛选到的54株乳酸菌的毒力因子进行基因检测，PCR扩增结果显示（表2），54株乳酸菌均不存在毒力因子相关的cylA基因

叶培麟 2024-10-14 08:55:10

    将筛选后的乳酸菌，37℃液体培养24 h后，固体培养基划线再次培养24h观察单菌落颜色、形状、表面特征、边缘形状、色泽、透明程度、湿润程度等。 如表1所示，21株菌株菌落颜色均为乳白色，均为圆形微隆，乳酸菌菌落表面光滑、湿润，边缘整齐，均表现为不透明。 表1 乳酸菌的形态特征

叶培麟 2024-10-14 08:53:00

    1、试验前，先进性预实验，把浓度调到酶标仪可检测范围 2、多位点采样，混匀在进行检测 3、样品研磨后的钢珠回收后，不可放回原瓶，应放置在新的瓶中，做好标签。 4、严格按照说明书的步骤和用量操作,不要随意改变。

叶培麟 2024-10-14 08:48:13

    将粉碎菜籽粕随机分为2组，对照组（C组）接种5%复合益生菌菌液，试验组（T组）接种5%复合益生菌菌液+1g/kg复合酶制剂，分别加入等体积蒸馏水（水分含量50%）混合均匀后，装袋（带排气阀）密封室温发酵，每组18袋，每袋500 g；发酵第1、2、3、5、7、10 d 每组分别取样3袋，进行发酵指标测定