祁有朝 2023-08-03 16:09:31

    基于OPLS-DA结果，根据VIP ≥ 1、FC ≥ 2和FC ≤ 0.5标准筛选出具有显著差异的代谢物，通过火山图表示两种枸杞中代谢物差异水平，并用聚类热图（附件）对差异物质进行分析，结果如图6、7和表2所示。黑果枸杞和黄果枸杞（BL vs YL）中共有487个差异代谢物，占总代谢物的44.11%，包括上调代谢物235个和下调代谢物252个。其中包括51种脂质、4种甾体、23种有机酸、21种萜类、79种生物碱、34种其它类、25种木脂素和香豆素、4种醌类、115种黄酮、11种核苷酸及其衍生物、93种酚酸、27种氨基酸及其衍生物。 对差异代谢物进行log2(FC)排序，筛选出差异倍数前20（上调和下调）的代谢物，结果如表3所示。黄果枸杞和黑果枸杞相比上调的前20差异代谢产物有生物碱5种、黄酮4种、酚酸3种、有机酸2种、其它类2种、木脂素和香豆素1种、醌类1种、萜类1种、脂质1种，其中上调差异倍数最大的代谢物是醛类化合物的4-羟苯基丙烯醛，在黄果枸杞种约为黑果枸杞的5.2×104倍；下调的差异代谢产物中13种黄酮、2种酚酸、2种生物碱、1种萜类、1种氨基酸及其衍生物、1种有机酸，差异倍数最大的是黄酮类的1,8-二羟基-2,6-二甲基-9-蒽酮，在黄果枸杞种约为黑果枸杞的6.4×10-6倍。从表3中可以看出，在黄果枸杞中上调的代谢产物种类较多，主要是生物碱和黄酮，而下调幅度最大的代谢产物主要集中在黄酮。

祁有朝 2023-08-03 16:02:55

    如表所示（见附件），两种枸杞中每种成分排名前十的组分中相同代谢产物中黄果枸杞含量较高（≥10%）的有棕榈酸、16-甲基十七烷酸、硬脂酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷、槲皮素-7-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-(4''-O-葡萄糖基)鼠李糖苷、1-O-对香豆酰-D-葡萄糖、对香豆酸-4-O-葡萄糖苷、4-O-(3'-O-α-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰奎尼酸、1,3-O-双咖啡酰奎宁酸；相对含量中等（5%-10%）的有α-亚麻酸、γ-亚麻酸、枸杞亚精胺C、枸杞亚精胺H、枸杞亚精胺I、枸杞亚精胺A、苯基丙酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、4-O-(4'-O-α-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰奎尼酸；含量较少（＜5%）的有溶血磷脂酰胆碱18:0、溶血磷脂酰胆碱18:3(2n异构)、溶血磷脂酰胆碱18:3、溶血磷脂酰胆碱16:0、溶血磷脂酰胆碱18:2(2n异构)、甜菜碱、1-甲氧基-吲哚-3-乙酰胺、1H-咪唑并(4,5-D)哒嗪-2-胺、N-阿魏酰酪胺、N-反式-阿魏酸酰对羟基苯乙胺、枸杞亚精胺E、7-甲氧基-3-[1-(3-吡啶基)亚甲基]-4-二氢色原酮、槲皮素-3-O-洋槐糖苷、柽柳黄素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、3,5,7,4'-四羟基-8-甲氧基黄酮-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷、咖啡酸、水杨酸-2-O-葡萄糖苷、邻苯二甲酸二异丁酯、1-O-阿魏酰-β-D-葡萄糖。 黑果枸杞中相对含量较高（≥10%）的有棕榈醛、16-甲基十七烷酸、硬脂酸、二咖啡酰亚精胺、N1-咖啡酰-N10-二氢咖啡酰亚精胺；相对含量中等（5%-10%）的有α-亚麻酸、γ-亚麻酸、溶血磷脂酰胆碱18:3(2n异构)、溶血磷脂酰胆碱18:3、溶血磷脂酰胆碱18:0、枸杞亚精胺C、枸杞亚精胺B、紫铆素-7-O-葡萄糖苷、柚皮素-4'-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-(6''-O-对香豆酰)槐糖苷-7-O-鼠李糖苷、咖啡酸；含量较少（＜5%）的有溶血磷脂酰胆碱18:1(2n异构)、溶血磷脂酰胆碱16:0、枸杞亚精胺H、枸杞亚精胺I、甜菜碱、咖啡酰-二氢咖啡酰亚精胺、1-甲氧基-吲哚-3-乙酰胺、N-单肉桂酰基腐胺、槲皮素-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷、槲皮素-7-O-芸香糖苷、鼠李素-3-O-芸香糖苷-5-O-鼠李糖苷、7-甲氧基-3-[1-(3-吡啶基)亚甲基]-4-二氢色原酮、异鼠李素-3-O-芸香糖苷-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(4''-O-葡萄糖基)鼠李糖苷、4-对香豆酰鼠李糖基-(1→6)-D-葡萄糖、1-O-咖啡酰-β-D-葡萄糖、香草酸-4-O-葡萄糖醛酸苷、异绿原酸A、1-O-对香豆酰-β-D-葡萄糖、二氢咖啡酰葡萄糖、丁香醛-4-O-葡萄糖苷、水杨酸-2-O-葡萄糖苷、4-羟基苯甲酸。

祁有朝 2023-08-03 16:01:09

    在OPLS-DA得分图中，两种枸杞在第一主成分轴上明显分离，横向距离越远说明两种代谢物之间成分具有差异，图中数据说明两组样本间存在明显差异。根据OPLS-DA模型分析代谢物，用R2X、R2Y、Q2作为模型的预测参数，其中R2X和R2Y分别表示模型对X和Y矩阵的解释率，Q2表示模型的预测能力，这三个指标越接近于1时表示模型越稳定可靠Q2 > 0.5时可认为是有效的模型，Q2 > 0.9时为出色的模型。如图4-B所示，R2X为0.785，R2Y等于1，Q2是0.987，表示模型可靠，且Q2 > 0.9，表明该模型非常出色，可根据其得到的VIP值进行差异代谢物的筛选。（图见附件）

祁有朝 2023-08-03 15:58:43

    为了了解两种枸杞之间的差异，对样品进行PCA主成分分析，结果显示主成分1的贡献率为70.57%，主成分2的贡献率为8.84%，PC1和PC2反映出枸杞果实的主要信息特征。各组枸杞样本组内聚集在一起，组内变异度较小重复性高；组间明显分离，说明不同品种枸杞代谢物组分有明显差异。将代谢物数据进行归一化处理后，对所有样品进行聚类分析。结果显示，不同品种间存在不同的分组模式，黑果枸杞成分主要集中在黄酮类和生物碱，黄果枸杞代谢成分主要是脂质、氨基酸及其衍生物和其它类。结合PCA和聚类分析结果，表明两种枸杞中存在不同的代谢特征。（图见附件）

祁有朝 2023-08-03 15:56:39

    通过与MWDB数据库进行对比分析确定了代谢产物的结构，两种枸杞共鉴定出12类1104种代谢产物，包括氨基酸及其衍生物78种、酚酸176种、核苷酸及其衍生物53种、黄酮211种、醌类12种、木脂素和香豆素48种、生物碱158种、萜类44种、有机酸66种、甾体7种、脂质147种和其它类104种代谢产物（图见附件）；其中酚酸、黄酮和生物碱三类代谢产物占比最高，占总代谢物的48.4%。