王丽丽 2023-08-03 16:44:45

    实验选取了两种不同直链淀粉含量的青稞品种，分别为肚里黄（D，直链淀粉含量25.06%）和甘垦糯2号（W，直链淀粉含量7.59%），其中肚里黄产自青海，2020年由青海省农林科学院提供，甘垦糯2号产自甘肃，2020年由甘肃省农业工程技术研究院提供。实验所用β-葡聚糖购买自爱尔兰Megazyme International公司，有低（<11 cSt）、中（20-30 cSt）、高（>100 cSt）3种不同的粘度，分子量分别为1.79×105 Da、2.51×105 Da、4.95×105 Da，纯度均在95%以上，用L、M、H表示。 1 青稞淀粉的提取 青稞籽粒经过挑选和除杂后，置于精米机中经过碾削处理（碾削率：20%）后浸泡在0.5%的无水亚硫酸钠溶液中，比率为5:1 v/w，4℃下浸泡60 h，偶尔搅拌。除去浸泡的液体，用蒸馏水洗涤软化的青稞籽粒，然后用打浆机打浆并过80目筛，室温25℃静置3 h。滤液离心（3000×g，20 min），弃上清液，刮去上面的有色物质，只留底部白色的淀粉，用蒸馏水将底部的淀粉再次纯化后离心（3000×g，20 min）。分别连续水洗、醇洗各三次，将淀粉刮出置于平皿中，室温干燥24 h，过100目筛并贮藏备用。 2 不同直链淀粉含量的青稞淀粉 按Megazyme直链淀粉试剂盒的方法测定肚里黄青稞淀粉和甘垦糯2号青稞淀粉的直链淀粉含量，结果分别为8%和25%。为了更清晰地探究直链淀粉含量对青稞淀粉的影响，将肚里黄和甘垦糯2号按一定比例充分混合，过100目筛并测定直链淀粉含量，分别复配出直链淀粉含量为14%和20%的青稞淀粉。 3淀粉颗粒结构观察 青稞淀粉的颗粒结构采用扫描电镜（SEM）在加速电压为10 kV下观察。所有样品均镀金，放大倍数为800×和2k×。此外，采用偏光显微镜（PLM）在放大倍数为400×下观察分散在去离子水中的青稞淀粉颗粒（1%，w/w）。 4种不同直链淀粉含量的青稞淀粉（HBS）的扫描电镜和偏光十字照片如图所示。这4种HBS的颗粒形貌相近，差别不大。淀粉颗粒呈饼状形，表面光滑、边缘整齐，无孔洞和裂纹，颗粒大小不均匀。图中可以看到HBS颗粒包含两种类型，包括大的椭圆形A型颗粒和小的球形B型颗粒。由于淀粉中交替存在的结晶区和非结晶区，使天然淀粉在偏光显微镜下呈现出“马耳他十字”。4种HBS都具有明显且完整的偏光十字，由此可知4种淀粉链的不同直链淀粉含量并没有改变淀粉的偏光十字，也可能是因为它们之间直链淀粉含量并没有很大差距。

王丽丽 2023-08-03 16:32:51

    所有青稞样品过80目筛。 1.称样:100mg，记录 2.加10mL((PH5)乙酸钠缓冲液)振荡5秒样品管，再加0.1m(未稀释的bottle1.空白加0.1ml缓冲液)，振荡3S。 3.瓶盖微松后放入沸水开始计时，2min拧紧瓶盖并混匀，再过5min,10min各混习5s，15min后(加酶后)停止水浴，混匀放入50℃水浴平衡5min。 4.样品管加入0.1ml未稀释的bottle2，振荡3s，空白管加0.1ml缓冲液。 5.拿至室温下平衡10min。 6.分别取2ml于小离心管在13500rpm下离心5min，然后取上清液1ml于盛有10ml的缓冲液中并混匀。 7.取0.1ml于5ml管中，真加三个葡萄糖标准容液0.1ml，加3mLGOPOD于5ml管50℃水浴中孵育20mim，酶标仪在510nm处测吸光度。 结果显示:所测的31种青稞样品总淀粉含量平均值为55.20%。总淀粉含量在46.05%——60.83%之间。

王丽丽 2023-08-03 16:29:34

    A.淀粉预处理 1.准确称量样品20-25mg，包括参考样品，精确到小数点后一位，于15mL离心管中。 2向离心管中加入1mlDMSO(4)，用漩涡拌器搅拌，瓶盖微松，于沸水浴中直样品完全分散(大约1min)，确保无凝胶状淀粉块。 3.将管置于涡旋混合器上大力混匀，后置于沸水浴中沸水15mn，期间间歇搅拌5(min)。 4.将离心管室温下静置大约5min，加入2mL95%的乙并搅匀，再加入4mL乙醇，倒置混匀，淀粉沉淀会形成，让离心管放置15min。 5.在2000g(3700rpm)下离心5min，弃上清，倒置于纸巾上沥干(10min)。确保乙醇都干了，在随后的直链、支链淀粉的测定中使用该沉淀。 6.加入2mL4)淀粉离心入沸水浴中15m混，确保没有凝胶块7转25m容量用3.反复清洗并定容此为溶液A，溶液配制2h 内完成。 B.支链淀粉-Con A沉淀物和直链淀粉测定 1.取1mL 溶液A至2mL离心管，加入0.5mL的5.，轻轻摇匀，避免泡沫生成。 2.离心管室温放置1h，随后室温下14000g离心10分钟。(有效沉淀支链淀粉时间1h，但超过2h后直链会沉淀) 3.将1mL 上清液转移到 15mL 离心管，加入 3mL 1.使pH 降到 5，混合后于沸水加热5min 使之变性。 4.取出置于40℃水浴中使之平衡5min，加入0.1mL6，在40℃孵育30min,2000g(3700rpm)下离心5min。 5.取1mL上清液加入4mL GOPOD 于 10mL 离心管中，40℃水浴20min，同时培养空白组和葡萄糖对照。(空白组:1.0mL 1.+4mLGOPOD;葡萄糖对照:0.1mL葡标+0.9mL 1.+4mL GOPOD) 6. 510nm 处测吸光度。 C.淀粉总量测定 1.将0.5ml溶液A 与4mL 1混合。 2.加0.1mL 6.，在40℃孵育 10min。 3.取1mL于试管，加入4mLGOPOD混匀，在40℃水浴20min，此孵育与B操作样品同时进行。 计算: 直链淀粉含量计算%=A上清液/A总淀粉x66.8

王丽丽 2023-08-03 16:24:35

    A.淀粉预处理 1.准确称量样品20-25mg，包括参考样品，精确到小数点后一位，于15mL离心管中。 2向离心管中加入1mlDMSO(4)，用漩涡拌器搅拌，瓶盖微松，于沸水浴中直样品完全分散(大约1min)，确保无凝胶状淀粉块。 3.将管置于涡旋混合器上大力混匀，后置于沸水浴中沸水15mn，期间间歇搅拌5(min)。 4.将离心管室温下静置大约5min，加入2mL95%的乙并搅匀，再加入4mL乙醇，倒置混匀，淀粉沉淀会形成，让离心管放置15min。 5.在2000g(3700rpm)下离心5min，弃上清，倒置于纸巾上沥干(10min)。确保乙醇都干了，在随后的直链、支链淀粉的测定中使用该沉淀。 6.加入2mL4)淀粉离心入沸水浴中15m混，确保没有凝胶块7转25m容量用3.反复清洗并定容此为溶液A，溶液配制2h 内完成。 B.支链淀粉-Con A沉淀物和直链淀粉测定 1.取1mL 溶液A至2mL离心管，加入0.5mL的5.，轻轻摇匀，避免泡沫生成。 2.离心管室温放置1h，随后室温下14000g离心10分钟。(有效沉淀支链淀粉时间1h，但超过2h后直链会沉淀) 3.将1mL 上清液转移到 15mL 离心管，加入 3mL 1.使pH 降到 5，混合后于沸水加热5min 使之变性。 4.取出置于40℃水浴中使之平衡5min，加入0.1mL6，在40℃孵育30min,2000g(3700rpm)下离心5min。 5.取1mL上清液加入4mL GOPOD 于 10mL 离心管中，40℃水浴20min，同时培养空白组和葡萄糖对照。(空白组:1.0mL 1.+4mLGOPOD;葡萄糖对照:0.1mL葡标+0.9mL 1.+4mL GOPOD) 6. 510nm 处测吸光度。 C.淀粉总量测定 1.将0.5ml溶液A 与4mL 1混合。 2.加0.1mL 6.，在40℃孵育 10min。 3.取1mL于试管，加入4mLGOPOD混匀，在40℃水浴20min，此孵育与B操作样品同时进行。 计算: 直链淀粉含量计算%=A上清液/A总淀粉x66.8

王丽丽 2023-08-03 16:20:36

    青稞麸皮（2.00 g）依次与9毫升的α-淀粉酶（750 U/mL）、8.2毫升胃蛋白酶（25000 U/mL）和12.5毫升胰酶（800 U/mL）混合，在37摄氏度下模拟胃肠消化。消化后剩余的固体残渣中加入32%的粪便液和培养基，在37摄氏度环境中厌氧发酵0, 2, 6, 12, 24, 36, 48, 60和72小时，研究青稞麸皮中的多酚在体外消化中的释放。 结果显示，胃肠消化释放的多酚含量为319.59 mg/100 g，对于厌氧发酵，多酚含量随着发酵时间的延长，呈现先升高后降低的趋势，其中发酵48小时多酚的含量最高，为399.32 mg/100 g。