叶培麟 2024-10-14 08:40:19

    将瘤胃液放入灭菌后的1.5 mL离心管中，利用梯度稀释法，将瘤胃液稀释为10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，分别取100 μL涂布于含有1 %羧甲基纤维素钠的LB平板上，于37℃ 培养24 h后用适量 0.3% 的刚果红溶液进行染色20 min，之后用1 mol/L 的氯化钠溶液进行脱色。挑取水解圈较大的菌株纯化培养后进行编号，将纯化后的菌株与30%的甘油1:1混合保存于-80℃冰箱。

叶培麟 2024-10-14 08:39:13

    1.1.细胞复苏 （1）用37℃的恒温水浴锅预热IPEC-J2细胞生长培养液，打开超净工作台和细胞实验室的紫外线灯，消毒杀菌30min。 （2）进入细胞实验室关掉紫外线灯后，佩戴好防护用具，从液氮罐中取出IPEC-J2细胞冻存管。 （3）迅速放入37℃恒温水浴锅中，快速晃动使其完全融化。 （4）将融化的细胞液体转移到15mL离心管中，并添加2mLIPEC-J2细胞完全培养液，放入离心机中，以1000rpm/min离心5min，吸出上清液。 （5）向细胞沉淀中加入1mLIPEC-J2细胞生长培养液，轻轻重悬，接种在直径为100mm的细胞培养皿中，并轻柔摇晃均匀后，显微镜下观察细胞数量及细胞形态符合正常状态时，再放入细胞培养箱中培养（37℃，5%CO2），次日对细胞换液，并注意观察生长情况。

叶培麟 2024-10-13 16:28:40

    为提高互助八眉猪原种育繁场八眉猪的性能指标，稳定和扩大八眉猪核心群养殖规模，加强八眉猪活体保护，提升八眉猪保种能力和产业发展质量效益，壮大海东市八眉猪优势产业发展，工作站科技特派员深入 调研，全面了解养殖场养殖现状和存在的问题。 针对这些问题，科技特派员和养殖场负责人深入探讨，制定 了实际可行的原种八眉猪引进方案，并依托项目支撑，积极争取相 关政策支持和资金 10万元，从定边八 眉猪种质资源场引进8头种猪。 目前，项目已通过市农业农村局审查即将下达。 后期，工作站科技特派员将继续 发挥专业优势，持续关注养殖场 的发展需求，加强对养殖场人员 的技术培训，提高他们的科学养殖意识和操作技能。通过现场指导等方式，让养殖场工作人员熟练掌握种质资源保护与养殖管理的关键要点，不断推动养殖业的科技创新和转型升 级，为乡村振兴和畜牧业现代化发展贡献更多的智慧和力 量

叶培麟 2024-10-13 16:19:58

    种业是农业的“芯片”，是农业产业链中的源头，良种繁育基地建设是种业振兴五大行动之一，畜牧良种基地建设中，优良的种畜在畜牧业基地建设中尤为关键。近年来，全省畜牧良种补贴项目在我市的实施，有力的推动了畜禽良种化进程，同时，为了做好我省“八眉猪”的纯种选育和杂交培育，优良的原种畜是搞好选育工作的前提。通过不断引进原种畜，强化当地本品种选育，从而巩固和提升青海八眉猪的生产性能、种群质量，对加快全市种业振兴和畜牧业产业发展，促进农牧民增产增收具有积极的助推作用。 为提高互助八眉猪原种育繁场八眉猪提引复壮，由我中心实施的024年畜牧良种补贴（原种八眉猪引进）项目，经多方询价，从定边县八福原生态农业有限公司引进4头种公猪、4头种母猪，通过项目实施，引进8头原种八眉猪，导入八眉猪外血，降低近交系数，延长世代间隔，提高八眉猪的性能指标，稳定和扩大八眉猪核心群养殖规模，加强八眉猪活体保护，提升八眉猪保种能力和产业发展质量效益，壮大海东市八眉猪优势产业发展，为社会提供健康、优质、绿色的八眉猪猪肉产品。9月8日种猪全部引进到位，开展隔离观察。

叶培麟 2024-10-13 16:16:49

    （一）项目背景。近年来，我国加强了对畜牧业使用抗生素的法律法规管理，明确提出禁止滥用抗生素以减少兽药残留和抗药性问题，同时也要求提高动物源性食品的安全性。在此背景下，利用现代微生物发酵技术，用益生菌发酵复方中草药成为了研究的新宠。传统中草药发酵方法包括药粉混合发酵和药物直接发酵，发酵得到的中药产品质量参差不齐。现代中草药发酵技术结合微生态、生物工程和发酵工程等学科，利用单一或混合菌种直接发酵中草药，不仅提高中草药的利用率和适口性，增强药效，同时降低动物的饲养成本]。发酵对中草药具有多方面的优势：首先，通过微生物发酵能提高中草药资源的利用率。发酵能使中草药细胞破裂、活性成分暴露，从而提高药效、促进消化；在堆积过程中添加微生物可增强中草药利用率。其次，发酵可提高有效活性成分含量，某些成分的含量可增加数倍。不同研究显示，通过发酵可释放中草药中的多种活性物质，增强中草药的药用价值。第三，发酵还能产生新的活性物质，为活性成分的合成提供新途径。研究显示，发酵后出现具有增强抑菌活力的物质，也生成了新的前体化合物。最后，发酵还能减弱中草药的毒性作用。研究证实，发酵可分解中草药中的有毒物质，甚至将不能使用的中药转化为新的资源，具有广阔的应用前景。 在畜牧业领域，尤其是对于猪生产行业而言，发酵中草药的研究和应用尤为突出，不同阶段的猪只饲喂添加发酵中草药，能显著改善生长性能、促进肠道健康，并增强抗病能力。仔猪的初生阶段添加发酵中草药能够提高仔猪成活率，降低仔猪腹泻率，提高仔猪日增重。育肥阶段在饲料中添加发酵中草药，能够增加猪只的生长速度，提升饲料转化率，改善胴体品质。 本研究将研究发酵中草药对育肥猪生长性能、免疫性能、屠宰性能、肉质及肠道微生物的影响及其机制，为提高肥育猪的生长性能、改善育肥猪肉品质提供科学参考依据，为绿色饲料添加剂的研发与示范奠定基础。 （二）研究目标。本试验以微生物（3株乳酸菌和2株酵母菌）对中草药（陈皮、茴香、八角、肉桂、枸杞、丁香、肉蔻、姜、山楂、蒜粉）进行发酵处理，鉴定发酵品质，确定最佳发酵条件。再以杜×长×大三元猪作为研究对象，探讨在日粮中添加不同水平的发酵中草药对育肥猪生长性能、免疫性能、屠宰性能及肉品质的影响，以及肠道微生物多样性和功能的变化，从而为中草药提高畜禽肉品质及生猪健康养殖提供数据支撑。 （三）研究内容及实施方案 1. 研究内容：（1）益生菌发酵中草药条件优化与研究、品质鉴定试验；（2）发酵中草药对育肥期杜×长×大三元猪生长性能、屠宰性能及肉质性能的影响；（3）发酵中草药对育肥期杜×长×大三元猪肠道微生物群落及代谢产物的影响。 2. 试验方法：本项目将通过三个试验逐层深入地研究发酵中草药对育肥期三元猪生长性能、屠宰性能、肉质性能及肠道微生物菌群的影响及机制。 试验一、发酵中草药对育肥期杜×长×大三元猪生长性能、屠宰性能及肉质性能的影响。该试验以初始平均体重为30±1.00kg的生长育肥期杜×长×大三元杂交猪80头为试验对象，以不同添加量（基础日粮、基础日粮＋0.4 %（L组）、0.6 %（M组）、0.8 %（H组）发酵中草药）进行饲喂，试验期间测定其生长性能、采食量，计算其平均日增重及平均日采食量，在试验结束后将其屠宰并采集肉样进行肉品质分析。 试验二：发酵中草药对育肥期杜×长×大三元猪肠道微生物群落及代谢产物的影响.猪只屠宰后，收集其盲肠内容物，保存于-80；再基于16S rRNA测序技术对肠道菌群组成及结构进行分析，筛选出与生长性能相关的菌群用于后续实验。在前期试验的基础上，将生长性能与肠道微生物菌群和代谢功能通路进行关联分析，分析肠道微生物菌群通过代谢通路影响生长性能的机制。 （四）预期成果：1.与省内科研单位（省畜牧兽医科学院）建立紧密的协作关系，认真实施2024年人才项目洽谈会人才项目合作协议书确立的项目实施内容；2.开发出稳定性和生物活性优良的中草药益生菌复方产品1-2个，在试验基地推广应用，推进养殖场兽用抗菌药减量化行动。 （五）试验地点：1.益生菌发酵中草药条件优化与研究、品质鉴定试验在省畜牧兽医科学院开展，委托有资质的生产企业生产菌剂；2.应用试验在青海省互助八眉猪原种育繁场实施。 （六）试验期限:2024年5-10月 （七）项目成效。项目严格按照试验方案开展，按时完成了试验内容。项目的完成，得益于技术支撑单位的正确指导与科学研究，得益于项目试验基地大力配合，得益于上级主管部门资金支持和人才项目支持，确保了项目在规定时间内完成了试验任务，取得了相应的成果，为推进生猪养殖健康发展提供了科学依据。